אבקת בילירובין CAS 635-65-4מופק בעיקר ממרה. בילירובין אינו מסיס במים, מסיס בממיסים אורגניים כגון בנזן, כלורופורם ופחמן דיסולפיד, ומסיס מעט באתנול ובאתר. בילירובין יכול להיות מומס גם בתערובת חמה של אתנול וכלורופורם. מלח הנתרן של בילירובין מסיס בקלות במים, אך מלחי הסידן, המגנזיום והבריום שלו אינם מסיסים במים. בילירובין הוא גביש מונוקליני בעל צבע כתום בהיר או חום אדמדם עמוק. המוצק היבש שלו יציב יחסית, ותמיסת הכלורופורם גם יציבה יחסית בחושך. הוא אינו יציב בתמיסה אלקלית (כגון 0.1mmol/L sodium hydroxide) או כאשר נתקל ביוני ברזל תלת-ערכיים, והוא מתחמצן במהירות לביליוורדין. בילירובין יכול להיקשר לגליצין, אלנין או היסטידין. הוספת חלבון בסרום, ויטמינים או EDTA יכולה לייצב את הבילירובין.
1. הכנת מלח סידן בשיטת מיצוי עקיפה של מלח סידן: הוסף 3-3.5 פעמים של סופרנטנט רווי מי סיד לתוך מרה חזיר טרי תוך ערבוב, ולאחר מכן המשך לערבב במשך 5-10דקות, Ph{ {4}}, הסר את הקצף כשהוא מחומם ל-50 מעלות עם גזה, המשך לחמם לרתיחה, שמור למשך 2 דקות, מצנן, מסנן והשיג מלח סידן. הכנת מוצר מוגמר בילירובין: קח מלח סידן והוסף 0. פי 8 מכמות המים להכנת משחה, מסננת אותה דרך רשת 30-40, הוסף 0.3% נוגד חמצון לתסנין, הוסף מלח וחומצה כדי להתאים את ה-pH ל-1.5, הניחו לו לעמוד 4 שעות, מסננים, הוסיפו 8-10 פעמים את הכמות של 80% אתנול לעוגת המסנן, כתשו וערבבו היטב, הוסיפו נוגד חמצון, הניחו לו לעמוד לילה, והשג את לְזַרֵז. הוסף 4-6 פי כמות של 80% או יותר אתנול ונוגדי חמצון, מערבבים ומשרים למשך הלילה. חזור על התהליך הזה 3-4 פעמים וייבש את המשקע מתחת ל-70 מעלות כדי להשיג את המוצר המוגמר של בילירובין.
משקעים של מלח סידן [HCl, כבד נתרן סולפיט] → משקעים [אתנול, כבד נתרן סולפיט] → משקעים [70 מעלות ] → תוצר בילירובין.
2.הכנת סידן בילירובינאט בשיטת מיצוי כלורופורם: מרה חזיר טרי מותאמת ל-pH 12 עם נתרן הידרוקסיד, מחממים לרתיחה, מוסיפים תמיסת סידן כלורי, לאחר מכן מחממים לרתיחה, מצננים, מסוננים לקבלת סידן בילירובינאט. מרה חזירים [NaOH, CaCl2] → [pH 12, 100 מעלות ] הכנת אבקת בילירובין CAS 635-65-4 מלח סידן בילירובין מוצר מוגמר: מלח סידן בילירובין מותאם ל-pH 1-2 עם חומצה הידרוכלורית 1:1, המים החומציים מרוקנים, כלורופורם מופק עם כלורופורם, נשטף באתנול נטול מים, והתמיסה נשארת בטמפרטורה של כ-5 מעלות כדי להשיג את המוצר המוגמר של בילירובין.
מלח סידן בילירובין [HCl] → [pH1-2] תרכובת חומצה [כלורופורם, אתנול נטול מים] → מוצר מוגמר של בילירובין [5 מעלות]
3. שיטת מלח סידן משופרת להחמצת מלח סידן: קח מרה טרייה של חזיר והוסף 1% סידן הידרוקסיד, מערבבים היטב, מחממים במהירות ל-90-97 מעלות, שמור על חום למשך 10 דקות, ומסנן לקבלת מלח סידן. חימום ל-40 מעלות יגרום להופעת שומן, שניתן להסיר בעדינות. ניתן לשטוף את מלח הסידן שהתקבל פעם אחת במים חמים כדי להסיר עודפי אלקלי וזיהומים אחרים. קח מלח סידן והוסף יותר מפי 10 מכמות המים כדי לפזר אותו באופן שווה. הוסף 1% נוגד חמצון וערבב (60 ר/דקה) להוספת חומצה הידרוכלורית 1:2 טיפה. תוך 40 דקות, הגיעו ל-pH 2.0 והמתינו עד שה-pH יישאר ללא שינוי כדי לקבל חומר חומצי. מרה חזירים [1% סידן הידרוקסיד] ← [90-97 מעלות , 15 דקות] מלח סידן מרה [נוגד חמצון, חומצה הידרוכלורית] → [pH2,40min] שטיפת אלכוהול חומצה חומצית, שטיפת מים: בילירובין מחומצת מתפזר באופן שווה בטמפרטורת החדר עם פי 10 כמות אתנול, ה-pH לא צריך להיות גבוה מ-5, מוסיפים 0.5% נוגד חמצון, מערבבים ומשאירים כשעה לשכבה. עבור אל השכבה העליונה של תמיסת אלכוהול ואסוף את הבילירובין המשוקע. שטפו את הבילירובין במים חמים של 50 מעלות למשך כ-5 דקות, אסוף בילירובין צף, הוסף במהירות אתנול להתייבשות והסר אתנול כדי להשיג בילירובין גולמי. תרכובת חומצית [אתנול] → [1h] משקע בילירובין [50 מעלות מים חמים] → [אתנול] מיצוי, אידוי, התגבשות וייבוש של בילירובין גולמי: קח בילירובין גולמי והוסף 10 פעמים כלורופורם לנער ב-50 מעלות למשך 10 דקות. במידת הצורך, מחלצים 2-3 פעמים, והשאריות אמורות להיות לבנות. תמצית הכלורופורם עברה זיקוק בוואקום עד כמעט יבשה, וכתוצאה מכך נוצרו רוב גבישי הבילירובין. לאחר קירור לטמפרטורת החדר, הוסף אתנול וקירר עוד יותר ל-4 מעלות למשך 10 דקות. גבישי הבילירובין סוננו וטופלו באתנול או אתר נטול מים, ולאחר מכן ייבוש בוואקום לקבלת בילירובין באיכות גבוהה.
בילירובין גולמי [כלורופורם] → [10 דקות] תמיסת כלורופורם [התגבשות] → בילירובין באיכות גבוהה
4.הכנת תמיסת הידרוליזה בשיטת מיצוי שרף חילופי יונים: קח מרה פרה טרייה, סנן אותה עם גזה, הוסף 2מול/ליטר תמיסת נתרן הידרוקסיד כדי להתאים את ה-pH ל-10 תוך כדי ערבוב, הרתיחו וסנן לקבלת ההידרוליזט.
ספיחה ואלוציה של חומצת מרה על ידי עמוד שרף תמיסת הידרוליזה: יוצקים את תמיסת ההידרוליזה המבושלת לתוך עמוד השרף המחומם מראש עד שצבע השפכים נעשה כהה יותר והספיחה רוויה.
הוסף מים קרים עד שהטמפרטורה בתוך העמודה תרד לטמפרטורת החדר, ולאחר מכן הוסף תמיסת סודיום ביסולפיט הידרוכלוריד מדוללת מראש העמודה כדי להפוך את ה-pH של הקולחין ל-1.
יש לשטוף עם 75% אתנול, לאסוף כאשר המנקה היא תמיסה עכורה בצבע ירוק כהה, ולשטוף עד שהקולחים נהיים צלולים וה-pH קרוב לנייטרלי. לשטוף שוב עם 95% אתנול.
אסוף תמיסת elution אתנול להכנת חומצת מרה. תמיסת הידרוליזה [עמודת חילופי יונים] ← [75% אתנול, 95% אתנול] מחסום אתנול להוצאת בילירובין, ריכוז וייבוש: שחררו את כל 95% האתנול מהעמודה, השרו בכלורופורם למשך 10 דקות, ואספו חומר eluent של כלורופורם עד שאין מופיע צבע צהוב.
מזקקים את חומר ההוצאה של הכלורופורם עד ליובש כמעט, מוסיפים אתנול נטול מים וממשיכים להתאושש עד שאין כלורופורם. לסנן בעודו חם, לאסוף בילירובין, לייבש ולהשיג את המוצר המוגמר של בילירובין.
יולנדה
נייד: +86 -29-86107037-8012
אֶלֶקטרוֹנִי:sales9@konochemical.com
טל/ווצ'ט: 18729555803